产品货号：
KL230811
中文名称：
乳酸乳球菌电转感受态细胞制备试剂盒
英文名称：
Lactococcus lactis Electrocompetent Cell Preparation Kit
产品规格：
20T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是用于制备乳酸乳球菌电转感受态细胞的试剂盒。
保存：室温，有效期1年。
本试剂盒足够制备20次，共200管乳酸乳球菌电转感受态细胞（每管70μL）。
GM17液体培养基、含0.5M蔗糖和1%甘氨酸的GM17液体培养基、恢复培养基（含2mM CaCl2和20mM MgCl2的GM17液体培养基）、600nm分光光度计、电转仪。
一、电感受态细胞的制备
二、电转化乳酸乳球菌感受态细胞（本试剂盒不含相关试剂）
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- 操作简单，即开即用，用户不需要花时间优化条件。
- 制备得到的电转感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
- 主要用于乳酸乳球菌，但能否用于其他乳球菌不详。
- 最高转化效率可达到2×107个转化子/μg质粒DNA，但实际效率跟质粒长度、质粒浓度、恢复培养基等多种因素相关。
- 得到的电转感受态细胞可以用各种穿梭质粒DNA进行电转化。
| 组分 | 规格 |
| 制备溶液A | 50mL×3 |
| 制备溶液B | 50mL |
| 制备溶液C | 30mL |
保存：室温，有效期1年。
本试剂盒足够制备20次，共200管乳酸乳球菌电转感受态细胞（每管70μL）。
GM17液体培养基、含0.5M蔗糖和1%甘氨酸的GM17液体培养基、恢复培养基（含2mM CaCl2和20mM MgCl2的GM17液体培养基）、600nm分光光度计、电转仪。
一、电感受态细胞的制备
- 挑取平板划线后培养得到的新鲜单菌落，接种到5mL自备的GM17液体培养基中。30℃静置厌氧培养12～16小时。
- 转移2.5mL上步所得培养菌液到50mL自备的GM17液体培养基中。30℃静置厌氧培养12～16小时。
- 转移4mL上步所得培养菌液到自备的250mL含0.5M蔗糖和2.5%甘氨酸的GM17液体培养基中，30℃静置厌氧培养直到OD600达到0.5～0.8之间。
- 将培养物转移到无菌离心管中6000rpm 10分钟，弃上清。离心时将洗涤液B和洗涤液C放冰上预冷待用。
- 加入7mL的溶液A重悬细菌。此时细菌的浓度约为1×109个/mL。
- 重悬后室温放置30分钟，4℃ 6000rpm 10分钟，弃上清。室温放置30分钟很重要，不能跳过。
- 加入1.5mL预冷的溶液B重悬细菌，然后4℃ 6000rpm 10分钟，弃上清。
- 再加入1.5mL预冷的溶液C重悬细菌，然后4℃ 6000rpm 10分钟，弃上清。
- 再加入0.7mL预冷的溶液B重悬细菌，按每管70μL分装到1.5～2.0mL的离心管中，此时细菌的浓度约为1×1010/mL，共得10管电感受态细胞。
- 将感受态细胞全部放入-80℃冰箱待用。
- 不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。
二、电转化乳酸乳球菌感受态细胞（本试剂盒不含相关试剂）
- 将装有70μL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻（快速化冻的效果好于缓慢化冻）。
- 加入500ng左右质粒DNA并轻柔混匀。
- 迅速转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
- 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：12.5kV/cm (对0.2cm的电击杯，则为2.5kV，200?，25μF，相当于脉冲长度为4ms)。
- 各厂家电转仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作。
- 电击后迅速将细胞和1mL预冷的恢复培养基（配方见自备物品）轻柔混匀，再转移到1.5mL的塑料离心管中，30℃静置厌氧培养2小时。
- 取0.2mL涂盘于含相应抗菌素（由质粒的抗性基因决定）的GM17平板上，30℃厌氧培养1～2天。
- 观察并记录转化子，计算转化效率，并进行后续实验。
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